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cytométrie en flux

mis à jour le 07/11/2014


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film présentant la technique automatisée de dénombrement et d'identification cellulaire

mots clés : cytométrie, flux, dénombrement, cellules , BP PP, BTS ABM, BTS Biotechnologies, BTS BioAC, STL, laboratoire, médico-tech


Utilisation pédagogique d'une vidéo


Le film comporte plusieurs séquences permettant leur utilisation en pointillé au fil d'un cours sur la cytométrie de flux :
  1. Présentation du principe général
  2. Le système fluidique
  3. Le système optique
  4. Le système informatique
  5. La préparation des échantillons
  6. Les réglages
  7. L'enregistrement et les analyses des données
 

1 - Présentation du principe général


Ce système est né de la nécessité de mesurer et de discriminer des particules.
Il consiste en la détection et la mesure de cellules défilant devant une source lumineuse.
 

2 - Le système fluidique (à 1 min 26)

Il permet d'aspirer la suspension cellulaire dans la chambre d'analyse.
L'hydrofocalisation produit  son entrainement passif grâce à un second flux de gainage et permet un alignement et un défilé à grande vitesse des cellules une à une devant le système optique de détection.
Les cellules sont ensuite, soit triées et récupérées, soit éliminées.
 

3 - Le système optique (à 2 min 28)
Il est constitué de la source lumineuse LASER ( monochromatisme) et un jeu de filtres et miroirs qui permettent le cheminement de la lumière diffusée par les cellules jusqu'aux photodétecteurs convertissant l'influx lumineux en signal électrique.
L'interaction du faisceau avec la cellule dévie une partie de la lumière. La mesure de la lumière diffusée se fait selon le même axe pour mesurer la taille ou selon un axe à 90° pour mesurer la structure du noyau et la présence de granules internes.
 

4 - Le système informatique (à 4 min 07)

Le signal recueilli par les photodétecteurs est numérisé, stocké et analysé.

La présentation des résultats se fait sous forme de graphiques, histogrammes bi ou multiparamétriques qui font apparaitre sous forme de points les différentes populations cellulaires.
 
 

5 - La préparation des échantillons (à 8 min 55)

Elle consiste en un marquage préliminaire direct des cellules par une combinaison d'anticorps monoclonaux marqués par des fluorochromes.
 

6 - Les réglages (à 11 min 19)

Nécessaires avant toute analyse, ils consistent en plusieurs points :
  • alignement du cytomètre à l'aide de billes de latex calibrées fluorescentes,
  • réglages des photomultiplicateurs afin de limiter la saturation due aux forts signaux et de détecter les plus faibles,
  • compensation de fluorescence lors de l'utilisation simultanée de plusieurs fluorochromes.
 

7 - L'enregistrement et les analyses des données (à 13 min 47)

L'analyse des données permet d'isoler dans un premier temps les populations dans les diagrammes multiparamétriques.
Après avoir défini des seuils de positivité, il  y aura, dans ces populations cibles, recherche de l'expression de marqueurs qui permettra l'identification et la quantification de sous populations comme celles des LT CD4+ et LT CD8+ dans le suivi des infections par le virus de l'immunodéficience humaine (VIH).
 
auteur(s) :

POCHET Catherine

information(s) pédagogique(s)

niveau : brevet professionnel, bts, Terminale STL

type pédagogique : démarche pédagogique, leçon, connaissances

public visé : enseignant, élève, étudiant

contexte d'usage : classe, salle multimedia, travail autonome

référence aux programmes : référentiel des diplômes des filières

  • laboratoire :
    • Brevets de Technicien Supérieur Analyses de BIologie Médicale, Bioanalyses et Contrôles et Biotechnologies
    • Baccalauréat STL spécialité Biotechnologies
  • médicotechnique : Brevet Professionnel Préparateur en Pharmacie

fichier joint

information(s) technique(s) : lien avec la vidéo sur le site du CERIMES

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